更新日期：2023-12-14
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廠商性質(zhì)：生產(chǎn)廠家
所在城市：上海市
| 品牌 | 其他品牌 | 供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
|---|---|---|---|
| 應用領域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè) |
其原理是在末端脫氧核糖核苷酸轉移酶（Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT）的作用下，在基因組DNA斷裂時暴露出的3′-羥基（3′-OH）末端摻入被Alexa Fluor 488染料標志的dUTP，使凋亡的細胞被標志上綠色熒光，從而可以用熒光顯微鏡或流式細胞儀檢測。
本試劑盒為直接熒光標志法的TUNEL染色，染色步驟簡便，應用范圍廣泛，可用于檢測冰凍切片、石蠟切片和培養(yǎng)細胞的凋亡情況。
包裝清單：
| 產(chǎn)品編號 | 產(chǎn)品名稱 | 包裝1 | 包裝2 |
| SJ1272 | TUNEL細胞凋亡檢測試劑盒（Alexa Fluor 488） | 20T | 50T |
| ● | 說明書 | 一份 | |
TUNEL細胞凋亡檢測試劑盒產(chǎn)品組成：
編號 | 組分 | 20T | 50T |
試劑（A） | 50× Proteinase K | 20 ul | 100 ul |
試劑（B） | 10 × DNase I Buffer | 100 ul | 500 ul |
試劑（C） | DNase I | 20 ul | 100 ul |
試劑（D） | Equilibration Buffer | 2 ml | 10 ml |
試劑（E） | 5×TdT Enzyme Buffer | 200 ul | 1 ml |
試劑（F） | Recombinant TdT Enzyme | 20 ul | 100 ul |
試劑（G） | Alexa Fluor 488-dUTP | 20 ul | 100 ul |
試劑（H） | dATP | 20 ul | 100 ul |
試劑（I） | 封片劑（含DAPI） | 1.5 ml | 7.5 ml |
保存條件：
-20 ℃保存，一年有效。
操作步驟：
1、樣本處理：
a) 石蠟切片：經(jīng)二甲笨、酒精脫蠟，復水。脫蠟應充分。
b) 冰凍切片：流水沖洗，去除OCT包埋膠后，用純水洗3次。
c) 細胞飛片：用組織固定液固定后，用PBS洗三次，每次5分鐘。1% Triton X-100處理10分鐘，用PBS洗三次，每次5分鐘。
2、蛋白酶消化
將1ul 試劑（A）50× Proteinase K稀釋于50ul PBS中，滴加到組織上，37℃孵育10-20分鐘。消化結束后，用PBS洗三次，每次5分鐘。
3、陽性對照組織的處理
將組織用DNase I消化，以獲得斷裂的DNA，即成Tunel染色陽性的對照。陽性對照組織也可以選用小鼠的小腸組織切片。
純水 | 46 ul |
試劑（B）: 10 × DNase I Buffer | 5 ul |
試劑（C）: DNase I | 1 ul |
共計 | 50 ul |
將50 ul DNase I消化液滴加于組織上，37℃孵育10-30分鐘，消化結束后，用PBS洗三次，每次5分鐘。
4、Tunel標志染色:
Tunel標志染色前用50 ul Equilibration Buffer孵育標本5-10分鐘。孵育過程中按下表配制Tunel染色工作液。去除標本上的Equilibration Buffer后，直接滴加50ul Tunel染色液，37℃孵育1-2小時，染色結束后，用PBS洗三次，每次5分鐘。
試劑（D）Equilibration Buffer | 37 ul |
試劑（E）5×TdT Enzyme Buffer | 10 ul |
試劑（F）Recombinant TdT Enzyme | 1 ul |
試劑（G）Alexa Fluor 488-dUTP | 1 ul |
試劑（H）dATP | 1 ul |
共計 | 50 ul |
5、封片：
每組織上滴加一滴封劑，小心蓋上蓋玻片，避免產(chǎn)生氣泡。用吸水紙吸去多余的封片劑。熒光顯微鏡下觀察。
注意事項：
1、Proteinase K 消化時間需要摸索，冰凍切片 10 min 左右，石蠟切片時間應適當延長。
2、陰性對照體系：配制Tunel染色工作液時用純水替代TdT Enzyme。
3、懸浮細胞用離心的方法收集細胞，所有反應在離心管中進行，染色結束后，可在熒光顯微下觀察，也可以用流式細胞儀檢測。
4、Tunel標志染色時應注意避光。
5、實驗過程中請穿戴手套、實驗服等，做好個人防護。
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